北京時間8月12日凌晨，《科學(xué)》（Science）在線發(fā)表了中國科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)卓越創(chuàng)新中心（生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所）劉默芳研究組與國內(nèi)外多家實(shí)驗(yàn)室合作完成的以LLPS of FXR1 drives spermiogenesis by activating translation of stored mRNAs為題的研究論文。該研究報道了RNA結(jié)合蛋白FXR1可通過液-液相分離激活小鼠后期精子細(xì)胞中mRNA的翻譯，保障精子形成過程的正常進(jìn)行?！犊茖W(xué)》隨刊配發(fā)的法國人類遺傳研究所教授Martine Simonelig撰寫的展望評論（Activating translation with phase separation）提出，盡管RNP顆粒在發(fā)育過程中的動態(tài)變化已被描述，但解析這類顆粒的形成如何在體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)功能仍面臨挑戰(zhàn)，該成果推動了對于這一問題的研究進(jìn)展。

　　在精子細(xì)胞形變過程中，隨著細(xì)胞核被逐步壓縮，基因組的轉(zhuǎn)錄活動將逐漸降低直至完全停止。后期精子細(xì)胞發(fā)育所需基因需提前轉(zhuǎn)錄為信使核糖核酸（mRNA），然后以翻譯抑制狀態(tài)儲存于信使核糖核蛋白（mRNPs），至特定發(fā)育階段再被激活翻譯，以合成蛋白質(zhì)發(fā)揮功能。然而，這些后期精子細(xì)胞中儲存的mRNA如何被翻譯激活，科學(xué)家對其中的機(jī)制知之甚少。

　　為了探究后期精子細(xì)胞mRNA的翻譯激活機(jī)制，研究分析了不同發(fā)育階段小鼠睪丸的多聚核糖體蛋白譜，挖掘后期精子細(xì)胞中潛在的翻譯調(diào)控因子。結(jié)果顯示，RNA結(jié)合蛋白FXR1顯著富集于后期精子細(xì)胞的多聚核糖體組份中，且在小鼠睪丸中特異性高表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)XR1結(jié)合一大群特異性在后期精子細(xì)胞中翻譯的mRNA，且與EIF4G3等多個翻譯相關(guān)因子存在相互作用。生殖細(xì)胞特異性敲除Fxr1不影響靶mRNA穩(wěn)定性，但導(dǎo)致其在后期精子細(xì)胞中翻譯活性降低、蛋白表達(dá)減少。更重要的是，Fxr1敲除小鼠無精、雄性不育，表明FXR1對后期精子細(xì)胞的翻譯和精子細(xì)胞發(fā)育均至關(guān)重要。

　　機(jī)制研究表明，F(xiàn)XR1具有蛋白濃度依賴性的液-液相分離（Liquid-liquid phase separation，LLPS）性質(zhì)，且FXR1與EIF4G3等多個翻譯相關(guān)因子及靶mRNA都顯著富集于后期精子細(xì)胞中的FXR1顆粒中，暗示FXR1在后期精子細(xì)胞中相分離可能與其對靶mRNA的翻譯激活作用密切相關(guān)。研究利用可表征胞內(nèi)RNA翻譯狀態(tài)的TRICK報告系統(tǒng)和慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)在培養(yǎng)細(xì)胞和精子細(xì)胞水平證明，F(xiàn)XR1相分離能力與其在細(xì)胞內(nèi)形成顆粒及其靶RNA的翻譯激活緊密相關(guān)。研究利用CRISPR-Cas9結(jié)合半克隆技術(shù)構(gòu)建了在生殖細(xì)胞特異性敲入相分離能力缺失的FXR1突變小鼠模型。該小鼠表現(xiàn)為無精、雄性不育，證明FXR1相分離為后期精子細(xì)胞mRNA翻譯激活和精子形成所必需。

　　基于研究成果，科研人員提出工作模型：在球形精子細(xì)胞中，低水平表達(dá)的FXR1可協(xié)同其他RNA結(jié)合蛋白識別部分新轉(zhuǎn)錄的mRNA，在細(xì)胞質(zhì)中組裝成翻譯抑制狀態(tài)的mRNPs；進(jìn)入精子細(xì)胞后期，大量表達(dá)的FXR1發(fā)生相變并形成FXR1顆粒，招募EIF4G3等翻譯機(jī)器，激活FXR1顆粒中存儲mRNA的翻譯，保障精子細(xì)胞發(fā)育和精子生成。

　　研究工作得到科技部、國家自然科學(xué)基金、中科院、上海市科學(xué)技術(shù)委員會等的資助，獲得分子細(xì)胞卓越中心GTP中心、分子生物學(xué)技術(shù)平臺、細(xì)胞分析技術(shù)平臺、動物實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺等的支持，并得到美國加州大學(xué)圣地亞哥分校、武漢大學(xué)、南京醫(yī)科大學(xué)、上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所、美國貝勒醫(yī)學(xué)院等的科研人員的協(xié)助。

FXR1顆粒介導(dǎo)后期精子細(xì)胞翻譯激活